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蛋白表达和纯化实验

表达体?#21040;?#32461;
表达体系 宿主细胞 表达量 特点
原核 E.coli 0.1-100g ·   载体构建简单、表达量高 ·   容易形成包涵体、无翻译后修饰
酵母 Pichia Saccharomyces cerevisiae 0.1-100g ·   表达量?#32454;摺?#34507;白可以较好折叠 ·   缺少多种翻译后修饰
昆虫 Insect cell-Baculovirus 0.1-10g ·   表达量相对?#31995;汀?#26377;反应后修饰 ·   表达体系相对复杂
哺乳 293 CHO 0.1-10g ·   表达量低 ·   翻译后修饰完全、蛋白具有天然活性

流程和周期
流程 内容 详情 周期(工作日)
1 分子克隆,构建表达载体   ·   由客户提供基因或者代为克隆基因 ·   把基因克隆到相应的表达载体上 ·   对基因表达载体测序验证 5-10
2 小规模表达测试   ·   验证表达载体可以表达正确的蛋白 ·   摸索表达条件 5-10
3 大规模表达、纯化   ·   1-50升表达体系 ·   纯化蛋白 5-10
4 纯化后蛋白检测   SDS-PAGE、Western Blotting、LC-MS、HPLC、Activity Assay 1-5

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